液相色譜是一類分離與分析技術，其特點是以液體作為流動相，固定相可以有多種形式，如紙、薄板和填充床等。在色譜技術發展的過程中，為了區分各種方法，根據固定相的形式產生了各自的命名，如紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。

在操作高效液相色譜時：

有沒有為老是出現氣泡而崩潰？

有沒有為超聲波震蕩了一個小時，流動相還出現氣泡而暈倒？

有沒有為天氣晴好時沒出現氣泡，陰天、下雨天同一瓶出現氣泡而火大？

如果在操作高效液相色譜時，流動相出現了氣泡，那就等于整個工作進行不下去了。

? 超聲波震蕩了一個小時的流動相，為什么天氣晴好的時候沒出現氣泡，陰天、下雨天就會出現？

是因為陰天、下雨天空氣氣壓下降，引起溶在流動相中的空氣過飽和(晴天時氣壓高還沒飽和)，當高壓泵抽取流動相時，空氣析出，產生了氣泡。

? 超聲波震蕩了一個小時的流動相，為什么里面還有空氣呢？

這是由于在常壓下震蕩，驅趕空氣效果不行。如果把裝流動相的瓶子進行抽真空，同時進行超聲波震蕩，效果會非常好，只要1min，流動相中的空氣差不多沒了；經過這樣驅逐空氣的流動相，陰天、下雨天使用也不會出現氣泡了。省時，不用動不動半小時、一小時超聲波震蕩，效果非常好。

? 由于氣泡的存在，會造成色譜圖上出現尖銳的噪聲峰，嚴重時會造成分析靈敏度下降；氣泡變大進入流路或色譜柱時會使流動相的流速變慢或不穩定，使基線起伏。造成這個現象的主因有以下幾條：

一是流動相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡；

二是系統開始工作時未能將流路中的空氣驅趕干凈；

三是在注入樣品時不注意混入了空氣。

? 液相色譜儀在使用中，整個液路系統有兩個地方易產生氣泡：

1、泵頭吸液白管；

2、檢測口流通池。

? 氣泡產生的原因

溫度上升，壓力下降。溫度上升或柱溫上升，當接近試劑沸點時，試劑汽化產生氣泡，試劑中已含微小氣泡，因加熱變大而產生氣泡。壓力下降產生氣泡，流動相中一直包含微小氣泡，無論超聲過濾，均不能徹底去掉它，那么當壓力下降時，微小氣泡將長大，且多個小氣泡易聚集成大氣泡，從而影響正常實驗。

氣泡產生的原因及解決方法

? 泵頭及吸液白管

1、泵頭

泵頭是壓力變化最劇烈的地方，也是最易產生氣泡的地方。泵頭靠負壓而吸液，而負壓必然使流動相中的小氣泡長大，當泵腔變正壓時，已長大的氣泡未必能全部變小流入后續液路，則泵腔內將積存氣泡，從而影響吸液精度。鑒于此，泵頭上專門設計了排氣閥，便于泵頭排氣，觀察柱壓穩定了說明泵頭排氣成功。

2、吸液白管長氣泡

(1)吸液白管接觸空氣部位漏氣，產生可見氣泡。

吸液白管是常壓和負壓交臂變化部位，其漏表現為大氣進入白管內，而不易見到管內液體漏出。

處理方法：更換白管。

(2)濾頭堵

濾頭堵使得液體流入濾頭的速度下降，泵強制吸液而產生真空氣泡。

判斷：拔掉濾頭不再長氣泡則是濾頭堵。

處理方法：

a、30%硝酸水液超洗濾頭，20分鐘左右。

b、水超洗濾頭，注意換水多超幾次。

c、流動相汽化產生氣泡。尤其是夏天室溫高，沸點低的試劑易汽化，比如：乙酸，乙醚，氨水，石油醚等易于汽化。處理方法：超聲，降室溫。

? 檢測流通池長氣泡

流通池是易積存氣泡的地方，其對基線影響巨大，流動相流入色譜柱后，壓力越來越小，微小氣泡將逐漸長大，而流通池截面積遠大于鋼管面積，則氣泡在池內易長大，氣泡的特點是長大在無外壓的情況下，很難縮小到鋼管內經以下流出流通池，所以它就存在了池內。

處理方法：

1、對于示差檢測器(示差檢測器池只能耐幾個公斤壓力)，只能是反復沖洗斥資，舉高廢液瓶靠廢液管內液柱給池加一個微小反壓，所以這就造成了示差池子排氣困難些，但無它法。為了避免這類問題的出現，液相色譜實際分析過程中必須重視對流動相進行脫氣處理。

常用的脫氣方法有以下幾種：

a、吹氦脫氣法

使用在液體中比空氣溶解度低的氦氣，在0.1Mpa壓力下，以約60ml/min流速通入流動相10-15min以驅除溶解的氣體。此法使用于所有的溶劑，脫氣效果較好，但在國內因氦氣價格較貴，本法使用較少。

b、加熱回流法

此法的脫氣效果較好。

c、抽真空脫氣法

此時可使用微型真空泵，降壓至0.05-0.07MPa即可除區溶解的氣體。顯然使用水泵連接抽濾瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成過濾機械雜質和脫氣的雙重任務。由于抽真空會引起混合溶劑組成的變化，故此法適用于單一溶劑體系脫氣。對多元溶劑體系應預先脫氣后再進行混合，以保證混合后的比例不變。

d、超聲波脫氣法

它是目前實驗室使用最廣泛的脫氣方法，將配制好的流動相連同容器一起放入超聲波水漕中脫氣10-20min即可。該方法操作簡便，基本能滿足日常分析的要求。

e、在線真空脫氣法

把真空脫氣裝置串聯到儲液系統中，并結合膜過濾器，實現了流動相在進入輸液泵前的連續真空脫氣。此法的脫氣效果明顯優于上述幾種方法，并適用于多元溶劑體系。

2、在液相色譜系統開始工作前，可以用注射器連接恒流泵的排空閥，抽入流動相，將流路中的空氣驅趕干凈。

3、在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。