紫外分光光度法是根據物質的吸收光譜來研究物質的成分、結構和物質間相互作用的有效手段。紫外可見分光光度計是實驗室普及率較高的一類光譜儀器。由于靈敏度高、選擇性好、準確度高、適用濃度范圍廣，重要的是分析成本低、操作簡便、快速。因此，長期在分析領域扮演很重要的角色。

紫外分光光度計可以在紫外可見光區任意選擇不同波長的光。物質的吸收光譜就是物質中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波長的光能量，相應地發生了分子振動能級躍遷和電子能級躍遷的結果。

由于各種物質具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結構，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質的含量。

用途

? 檢定物質，根據吸收光譜圖上的一些特征吸收，特別是最大吸收波長λ-max和摩爾吸收系數ε是檢定物質的常用物理參數。這在藥物分析上就有著很廣泛的應用。在國內外的藥典中，已將眾多的藥物紫外吸收光譜的最大吸收波長和吸收系數載入其中，為藥物分析提供了很好的手段。

? 與標準物及標準圖譜對照將分析樣品和標準樣品以相同濃度配制在同一溶劑中，在同一條件下分別測定紫外可見吸收光譜。若兩者是同一物質，則兩者的光譜圖應完全一致。如果沒有標樣，也可以和現成的標 準譜圖對照進行比較。這種方法要求儀器準確，精密度高，且測定條件要相同。

? 比較最大吸收波長吸收系數的一致性。

? 純度檢驗。

? 推測化合物的分子結構。

? 氫鍵強度的測定實驗證明，不同的極性溶劑產生氫鍵的強度也不同，這可以利用紫外光譜來判斷化合物在不同溶劑中氫鍵強度，以確定選擇哪一種溶劑。

? 絡合物組成及穩定常數的測定。

? 反應動力學研究。

? 在有機分析中的應用有機分析是一門研究有機化合物的分離、鑒別及組成結構測定的科學，它是在有機化學和分析化學的基礎上發展起來的綜合性學科。

使用注意事項

1、溫度和濕度是影響儀器性能的重要因素。可以引起機械部件的銹蝕，使金屬鏡面的光潔度下降，引起儀器機械部分的誤差或性能下降；造成光學部件如光柵、反射鏡、聚焦鏡等的鋁膜銹蝕，產生光能不足、雜散光、噪聲等，甚至儀器停止工作，從而影響儀器壽命。維護保養時應定期加以校正。使用紫外分光光度計應具備四季恒濕的儀器室，配置恒溫設備，特別是地處南方地區的實驗室。

2、環境中的塵埃和腐蝕性氣體亦可影響機械系統的靈活性，降低各種限位開關、按鍵、光電偶合器的可靠性，也是造成必須學部件鋁膜銹蝕的原因之一。因此，使用紫外分光光度計必須定期清潔，保障環境和儀器室內衛生條件，做好防塵工作。

3、紫外分光光度計儀器使用一定周期后，內部會積累一定量的塵埃，最好由維修工程師或在工程師指導下定期開啟儀器外罩對內部進行除塵工作，同時將各發熱元件的散熱器重新緊固，對光學盒的密封窗口進行清潔，必要時對光路進行校準，對機械部分進行清潔和必要的潤滑，最后恢復原狀，再進行一些必要的檢測、調校與記錄。

操作流程及校準方法

1、紫外可見分光光度計光度測量

? 在模式選擇屏幕中選擇＜1.Photometric光度＞選項，將顯示參數配置屏幕；

? 用GOTOWL鍵設定測量波長；

? 按F2鍵設定進樣控制；

? 按START/STOP鍵時，測量開始，顯示測量屏幕；

? 如需做空白校正，應在測量前先設置空白樣品，然后按AUTO-ZERO鍵，將測量值置為OABS(100%)。

2、紫外可見分光光度計校正

? 開機預熱10分鐘足矣；

? 放入黑塊和標樣(沒有的自己配)，關閉蓋子；

? 校0；

? 把燈光對著黑塊，把透光度調0；

? 把燈光對標樣，將吸光度調到100%。

3、參比溶液介紹

參比溶液又稱空白溶液，測量時用作比較、不含被測物質但其基體盡可能與試樣溶液相似的溶液。通常用參比溶液掃描的曲線應是一條平坦的直線，有時基體中，雖不含被測物質，但含有別的物質，這時必須保證其不影響測試。經常碰到的是試劑空白中含有被測物質，此時必須經過純化將其除去，否則將影響測定結果。

4、紫外可見分光光度計使用注意事項

? 開機前應先預熱15分鐘，然后開機自檢；

? 濕度要控制在75%左右，溫度在5-30℃之間；

? 儀器要穩壓電源，接地要好，并且避免陽光直接照射。

常見故障排除

1、光源部分

(1)故障：氘燈不亮

? 原因

氘燈壽命到期(此種原因幾率最高)；

? 檢查

燈絲電壓、陽極電壓均有，燈絲也可能未斷(可看到燈絲發紅)；

? 處置

更換氘燈。

(2)故障：鎢燈不亮

? 原因

鎢燈燈絲燒斷(此種原因幾率最高)；

? 檢查

鎢燈兩端有工作電壓，但燈不亮；取下鎢燈用萬用表電阻檔檢測。

? 處置

更換新鎢燈。

(3)故障：鎢燈不亮

? 原因

沒有點燈電壓；

? 檢查

保險絲被熔斷；

? 處置

更換保險絲(如更換后再次燒斷則要檢查供電電路)。

(4)故障：氘燈不亮

? 原因

氘燈起輝電路故障；

? 檢查

氘燈在起輝的過程中，一般是燈絲先要預熱數秒鐘，然后燈的陽極與陰極間才可起輝放電，如果燈在起輝的開始瞬間燈內閃動一下或連續閃動，并且更換新的氘燈后依然如此，有可能是電路有故障，燈電流調整用的大功率晶體管損壞的幾率大。

? 處置

需要專業人士修理。

2、信號部分

(1)故障：吸光值結果出現負值(常見)

? 原因

沒做空白記憶、樣品的吸光值小于空白參比液；

? 檢查

將參比液與樣品液調換位置便知；

? 處置

做空白記憶、調換參比液或用參比液配置樣品溶液；

(2)故障：樣品室內無任何物品的情況下全波長范圍內基線噪聲大

? 原因

光源鏡位置不正確、石英窗表面被濺射上樣品；

? 檢查

觀察光源是否照射到入射狹縫的中央，石英窗上有無污染物；

? 處置

重新調整光源鏡的位置，用乙醇清洗石英窗；

(3)故障：信號的分辨率不夠具體表現是本應疊加在某一大峰上的小峰無法觀察到

? 原因

狹縫設置過窄而掃描速度過快，造成檢測器響應速度跟不上，從而失去應測到的信號；按常理，一定的狹縫寬度要對應一定范圍的掃描速度；或者狹縫設置得過寬，使儀器的分辨率下降，將小峰融合在大峰里了。

? 檢查

放慢掃描速度看一看或將狹縫設窄；

? 處置

將掃描速度、狹縫寬窄、時間常數三者擬合成一個優化的條件；

(4)故障：樣品室內無任何物品的情況下僅僅是紫外區的基線噪聲大

? 原因

氘燈老化、光學系統的反光鏡表面劣化、濾光片出現結晶物；

? 檢查

可見區的基線較為平坦，斷電后打開儀器的單色器及上蓋，肉眼可以觀察到光柵、反光鏡表面有一層白色霧狀物覆蓋在上面；如果光學系統正常，可能是氘燈老化，可以通過能量檢查或更換新燈方法加以判斷；

? 處置

更換氘燈、用火棉膠粘取鏡面上的污物或用研磨膏研磨濾光片(注意此種技巧需要有一定維修經驗者來實施)；

(5)故障：樣品出峰位置不對

? 原因

波長傳動機構產生位移；

? 檢查

通過氘燈的656.1nm的特征譜線來判斷波長是否準確；

? 處置

對于高檔儀器而言處理手段相對簡單，使用儀器固有的自動校正功能即可；而對于相對簡單的儀器，這種調整則需要專業人員來進行了；清洗比色皿，更換空白溶液。

(6)故障：樣品信號重現性不良

? 原因

排除儀器本身的原因外，可能是樣品溶液不均勻所致；在簡易的單光束儀器中，樣品池架一般為推拉式的，有時重復推拉不在同一個位置上；

? 檢查

更換一種穩定的試樣判定；

? 處置

采取正確的試樣配置手段；修理推拉式樣品架的定位碰珠；

(7)故障：做基線掃描或樣品掃描時基線或信號有一個大的負脈沖

? 原因

掃描速度設置得過快，信號在讀取時，誤將濾光片或光源鏡的切換當做信號讀取了。

(8)故障：沒有任何檢測信號輸出

? 原因

沒有任何光束照射到樣品室內；

? 檢查

將波長設定為530nm，狹縫盡量開到最寬檔位，在黑暗的環境下用一張白紙放在樣品室光窗出口處，觀察白紙上有無綠光斑影像；

? 處置

檢查光源鏡是否轉到位，雙光束儀器的切光電機是否轉動了(耳朵可以聽見電機轉動的聲音)；改變掃描速度。

(9)故障：做基線掃描或樣品掃描時基線或信號有一個長時間段的負值或滿屏大噪聲

? 原因

濾光片飼服電機“失步”，造成檔位錯位，尤其是國產電機；

? 檢查

重新開機有可能恢復，或打開單色器對照波長與濾光片的相對位置來檢查(注意打開單色器時要保護檢測器不被強光刺激)。

(10)故障：當儀器波長固定在某個波長下時吸光值信號上下擺動，特別是測量模式轉換為按鍵開關式的簡易儀器

? 原因

開關觸點因長期氧化所致造成接觸不良；

? 檢查

用手加重力量按琴鍵時，吸光值隨之變化；

? 處置

用金屬活化劑清洗按鍵觸點即可。

(11)故障：樣品室放入空白后做基線記憶噪聲較大，紫外區尤甚

? 原因

比色皿表面或內壁被污染、使用了玻璃比色皿或空白樣品對紫外光譜的吸收太強烈，使放大器超出了校正范圍；

? 檢查

將波長設定為250nm，先在不放任何物品的狀態下調零，然后將空比色皿插入樣品道一側，此時吸光值應小于0.07Abs；如果大于此值，有可能是比色皿不干凈或使用了玻璃比色皿；同樣方法也可判斷空白溶液的吸光值大小；

? 處置

更換飼服電機。

(12)故障：儀器零點飄忽不定主要反映在簡易儀器上

? 原因

在簡易儀器中，零點往往是通過電位器來調整，這種電位器一般是炭膜電阻制作的，使用久了往往造成接觸不良；

? 處置

更換電位器。

3、其他故障

(1)光門不能完全關閉

修復光門部件，使其完全關閉。

(2)透過率“100%”旋到底了

重新調整“100%”旋鈕。

(3)儀器嚴重受潮

可打開光電管暗盒，用電吹風吹上一會兒使其干燥，并更換干燥劑。分析儀器工作者要懂得儀器的日常維護和對主要技術指標的簡易測試方法，經常對儀器進行維護和測試，以保證儀器工作在理想狀態。